Benchmarks

GB 14930.2-94

7.3.5.2 将以上稀释的不同浓度消毒药中加菌液 2.5 mL(或加入一片可溶性菌片),对照管亦加同量细菌。

7.3.5.3 加菌后 5、10、15、30 min,每管依次取出 0.5 mL,加入含有中和剂的 4.5 mL 营养肉汤中。将上述营养肉汤管放 30℃培养 24 h,观察结果若发生混浊,即表示有菌生长,若肉汤不变混,应继续培养至 72 h。

7.3.5.4 结果判定:以最低浓度无菌生长的管为最低杀菌有效浓度,以无菌生长的最短消毒时间为该消毒液最低有效时间。

7.3.6 定量杀菌检验

定量杀菌检验,消毒剂与菌液作用方法同 7.3.5 定性杀菌检验,作用不同时间(5、10、15 min)将上述原液分别取出 0.5 mL,加 4.5 mL 中和剂,10 min 后进行活菌计数(按 GB 4789.2 执行),计算杀菌率,同时以生理盐水代替消毒液作对照,实验需重复 3 次。

杀菌率( $P\_t$ )的计算

$$\backslash text\{杀菌率\}(P\_t)(\backslash \%)\; =\; \backslash frac\{N\_0\; -\; N\_t\}\{N\_0\}\; \backslash times\; 100$$

式中: $N\_0$ ——为消毒前对照组菌数;

$N\_t$ ——为消毒后或实验组活菌数。

7.4 乙型肝炎表面抗原破坏试验

7.4.1 试验方法

采用固相放射免疫法(SPRIA)或酶联免疫试验法(ELISA)两种方法敏感度应测到:

SPRIA 法为 1~10 ng/mL;

ELISA 法为 15~20 ng/mL。

7.4.2 消毒方法

取含 $\backslash ge\; 1$ mg/mL 的纯化 HBsAg 200 $\backslash mu\backslash text\{L\}$ (或含 10%小牛血清的 HBsAg)加入 800 $\backslash mu\backslash text\{L\}$ 不同浓度的消毒液,简称“混合液”,分别作用不同时间,然后加入 20%硫代硫酸钠 0.1 mL 中和残留消毒剂,静止 10 min 后,再用 SPRIA 法或 ELISA 法测定。

7.4.3 SPRIA 法测定方法

用 20 孔塑料盘,每孔加入用抗-HBs 包被的聚苯乙烯珠一粒,加入消毒剂后的“混合液”0.2 mL,置 43℃孵育 1.5 h。每个样品两孔,然后用去离子水洗涤 4~5 次,加入 $^\{125\}\backslash text\{I\}$ 标记的抗-HBs 0.2 mL,置 43℃孵育 1 h,用去离子水洗 4~5 次,然后用 $\backslash gamma$ 计数器测定 cpm 值,每次试验需做药盒的阳性、阴性对照,中和剂对照,药物对照及 HBsAg 对照,药盒的 $P/N$ 值 $\backslash ge\; 5$ 。药盒质量合格,试验成立。若实验样品与阴性对照比值 $\backslash ge\; 2.1$ 时则消毒药物无效,若比值 $\backslash lt\; 2.1$ 时则为合格。

7.4.4 ELISA 法测定方法

7.4.4.1 用聚苯乙烯板作固相载体,将抗-HBs 用 pH9.6 碳酸盐缓冲液稀释,使蛋白含量为 10~20 $\backslash mu\backslash text\{g/mL\}$ ,取 0.1 mL 稀释后的抗体,加入聚苯乙烯孔内,置 4℃冰箱中过夜,用洗涤液洗涤 3 次。

7.4.4.2 封闭空位,每孔加 5%小牛血清磷酸盐缓冲液 0.1 mL,37℃温育 2 h,用洗涤液洗涤 3 次。

7.4.4.3 加入消毒剂后的“混合液”0.1 mL,每个样品做 2 孔,同时作药盒的阳性和阴性对照,中和剂,消毒药物及 HBsAg 对照,37℃温育 2 h,用洗涤液洗涤 3 次。

7.4.4.4 加入用辣根过氧化物酶标记的抗-HBs 0.1 mL,37℃温育 1.5 h,用洗涤剂洗涤 4 次。

7.4.4.5 加入底物-邻苯二胺(OPD)溶液 0.1 mL,15~30 min 后加入 1 mol/L 硫酸 0.5 mL,用分光光度计测定吸光度值。

7.4.4.6 若药盒 $P/N$ 值 $\backslash ge\; 5$ ,则药盒合格,若试验样品 $P/N$ 值 $\backslash ge\; 2.1$ 时则消毒药不合格, $P/N$ 值 $\backslash lt\; 2.1$ 时则为合格。

7.4.5 计算

3