واصبی و همکاران

۲۴

اجباری و کاتالاز منفی با داشتن پرگنه های محدب با
حاشیه ی صاف به رنگ سفید تا بژ و لعابدار روی محیط
NA حاوی ساکارز، تولید رنگدانه فلورسنت روی محیط
KB بر اساس آزمونهای گروه (+,-,-,-) LOPAT و
GATTa (+,-,-,-) به عنوان جدایه های Pss شناسایی شدند
(لیوت و همکاران ۱۹۶۶، گاردن و همکاران ۱۹۹۹). جدایه
های Pss از نواحی جغرافیایی عجب شیر ( Pss -26)، مرند
( Pss -82)، سپیدان ( Pss -170، Pss -172، Pss -174 و Pss -
176)، میانه ( Pss -240) و سردرود ( Pss -181 و Pss -186)
جمع آوری شدند.

آزمون بیماری زایی

جدایه های Pss با القاء علامت شاخص HR یعنی تشکیل
مناطق بافت مرده در محل تلقیح باکتری به عنوان جدایه هایی
با واکنش مثبت در آزمون فوق حساسیت برای آزمون
بیماری زایی انتخاب شدند (شکل ۱). جدایه های بیماری زا،
۱۴ روز پس از تلقیح در سطح سرشاخه های بریده و سبز
زردآلو و لوبیا سبز، علایم بافت مردگی در مقایسه با شاهد
منفی نشان دادند. بر اساس وسعت بروز علایم روی
زردآلو، جدایه ها به دو گروه کم آزار با زخم های بافت-
مرده ی کم عمق (جدایه های Pss -172 و Pss -181) و پرآزار
با زخمهای بافت مرده ی عمیق و وسیع در محل تلقیح
(جدایه های Pss -26، Pss -82، Pss -170، Pss -174، Pss -176،
Pss -186 و Pss -240) تقسیم شدند. روی غلاف لوبیا سبز
جدایه Pss -82 با تشکیل زخمهای بافت مرده ی قهوه ای تیره
رنگ بزرگ به قطر تقریبی سه میلی متر به عنوان جدایه ی
پرآزار و سایر جدایه ها با تشکیل زخمهای بافت مرده به
قطر تقریبی یک میلی متر در محل تلقیح به عنوان جدایه های
کم آزار شناسایی شدند. آزمون کخ با جداسازی مجدد
جدایه های Pss از گیاهان مایه زنی شده روی محیط KB و
شناسایی و تایید جدایه ها با استفاده از آزمونهای
بیوشیمیایی و مولکولی انجام گرفت.

مبنای حداکثر هم ردیفی با ترادف های مورد مطالعه با
ارزش مورد انتظار ( $e\; ext\{-value\}$ ) نزدیک به صفر در تحقیق
حاضر انتخاب شدند. ترادفهای ویرایش شده با استفاده
از روش MUSCLE (ادگار ۲۰۰۴) در نرم افزار Molecular
Evolutionary Genetics Analysis, MEGA 6 (تامورا و
همکاران ۲۰۱۳) هم ردیف سازی شدند.

ترسیم تبارنماها

فاصله ی ژنتیکی توالی جدایه های مختلف و ارتباط
فیلوژنتیکی آنها با یکدیگر و همچنین با تعدادی از جدایه-
های موجود در بانک ژن، بر مبنای استنتاج بایزین با
استفاده از نرم افزار MrBayes v.3.2.2 و الگوریتم مونت
کارلو چین مارکوف - Markov Chain Monte Carlo (MCMC)

با میانگین انحراف معيار نرخ تقسیم ۰/۰۱، با
ایجاد ۱۰۰۰۰۰۰۰ نسل و ذخیره یک تبارنما در هر ۱۰۰۰
نسل ترسیم شدند. پس از چشم پوشی از اولین ۲۵ درصد
نسل ها به عنوان معيار burn-in مابقی ۷۵ درصد
تبار نماهایی که در هر نسل ذخیره شده بودند، به صورت
تبارنمای اجمالی همراه با مقادیر مربوط به توزیع احتمال
پسین ( posterior probability ) ارایه شدند رانکوئیست و
همکاران (۲۰۱۲). بهترین مدل جایگزینی نوکلئوتیدها برای
هر ژنگاه با استفاده از معیار اطلاعاتی آکائیک Akaike ) ( Information Criterion-AIC (آکائیک ۱۹۷۴) و نرم
افزار MrModeltest v. 2.3 (نیلاندر ۲۰۰۴) اجرا گردید.
تبارنماهای ترسیم شده با استفاده از برنامه FigTree
v1.4.2 ( http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree/ )
مشاهده شدند.

نتایج

جداسازی و شناسایی جدایه ها

از میان ۲۹۳ جدایه ی باکتریایی جداسازی شده از
درختان زردآلو با علایم شاخص شانکر تنه و شاخه و
ترشح صمغ همراه با بلاست شکوفه، تنها نه جدایه هوازی