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第二部分 功能学检验方法

⑤原卟啉标准液。

a. 原卟啉标准贮备液 (50 mg/L)：称取 5 mg 原卟啉，加 4 ml 无水乙醇使之溶解，以 1.5 N HCl 稀释至 100 ml。

b. 原卟啉标准中间液 (1.0 mg/L)：取 2 ml 原卟啉贮备液，以乙酸乙酯与乙酸 (4:1) 混合液稀释到 100 ml。

c. 原卟啉标准应用液 (0.1 mg/L)：取 1 ml 原卟啉中间液，以乙酸乙酯与乙酸 (4:1) 混合液稀释到 10 ml。

(4) 实验步骤：(表 4)

表 4 红细胞内游离原卟啉测定实验步骤

试剂	样品管	空白管	标准管
肝素 (ml)	0.10	0.10	0.10
全血 (ml)	0.02
水 (ml)		0.02	0.02
5%硅藻土悬浊液 (ml)	0.15	0.15	0.15
原卟啉标准应用液 (ml)			0.5
乙酸乙酯与乙酸 (4:1) 混合液 (ml)	4	4	3.5

注：按上表依次加入各种试剂，在加入乙酸乙酯与乙酸混合液前，用混旋器混合已加入的混合液，然后边混合边加入乙酸乙酯与乙酸混合液。

离心 15 min，将各管上清液分别倒入 10 ml 比色管中，每管加 4 ml 0.5N 盐酸，振摇 5 min 静止使之分层，将上层溶剂抽出弃去，测定盐酸液的荧光强度 (30 min 内比色)。

(5) 荧光测量：

①若使用日立 MPF-4 型荧光分光光度计测定条件为激发波长为 403 nm，狭缝 10 nm；发射波长为 605 nm，狭缝为 5 nm，液槽为 1 cm 厚石英槽。

②若使用国产 930 型荧光光度计测试，条件为激发滤光片 420，荧光滤片 550，灵敏度 $1\; \backslash times\; 500$ ，满度开关开至最大，液槽为 1 cm 厚石英槽，检出灵敏度为 0.01 g/4 ml。在不同量原卟啉 (0 g, 0.01 g, 0.03 g, 0.05 g, 0.07 g, 0.1 g) 呈线性关系。

(6) 计算：

$$\backslash text\{血中原卟啉含量\; (g/L\; 全血)\}\; =\; \backslash frac\{\backslash text\{样品荧光强度\}\; -\; \backslash text\{空白荧光强度\}\}\{\backslash text\{标准管荧光强度\}\; -\; \backslash text\{空白荧光强度\}\}\; \backslash times\; \backslash text\{标准管原卟啉含量\; (g)\}\; \backslash times\; \backslash frac\{100\}\{\backslash text\{样品取样量\; (ml)\}\}\; \backslash times\; 10$$

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